海南芬德黄曲霉B1测试卡 深圳芬德生物供应 深圳芬德生物供应

黄曲霉m1检测试剂盒酶联免疫试验步骤

将所需试剂从4℃冷藏环境中取出，置于室温平衡30min以上,洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解，每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。

1编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

2加样反应：加标准品或样本50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶标记物50µl/孔，再加入50µl/孔的抗体工作液，用盖板膜封板，轻轻振荡5秒混匀，25℃反应30分钟。

3洗涤：小心揭开盖板膜，甩去孔内液体，每孔加350µl工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，***一次拍干（用吸水纸拍干，拍干后未被***的气泡可用干净的***头刺破）。

4显色：每孔加入底物液A50µl，再加底物液B50µl，轻轻振荡5秒混匀，25℃避光显色15分钟（若蓝色过浅，可适当延长反应时间）。

5终止：每孔加入终止液50µl，轻轻振荡混匀，终止反应。

6测吸光值：用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值（建议用双波长450/630nm）。测定应在终止反应后10分钟内完成。

样本处理前须知：实验器具必须洁净并使用一次性吸头，以避免污染干扰实验结果。

配液：配液1：样本提取液70%甲醇，即V甲醇:V去离子水=7:3。5.3

样本前处理步骤：

谷物、饲料

1）称取2g粉碎样本于离心管中，再根据不同的检出限要求按下表加入样本提取液检测下限20ppb50ppb100ppb样本提取液4ml10ml20ml振荡5分钟，室温4000转/分离心5分钟。

2）取0.1ml上清，加入0.4ml去离子水，混匀备用。

谷物、饲料（须吹干）若要求检测下限为5ppb时，可按如下操作：

1）称取2g粉碎样本于离心管中，加入4ml样本提取液，振荡5分钟，室温4000转/分离心5分钟；

2）取1ml上层液体在50-60℃条件下用氮气或空气吹干；

3）先加入0.25ml70%甲醇溶解剩下的残留物，剧烈震荡2分钟；再加入1ml去离子水，混匀备用。

（注意：这一步甲醇与水的加液顺序不能颠倒）

粮油（菜油、麻油、色拉油、花生油等）

1）称取2g样本于离心管中，再根据不同的检出限要求按下表加入样本提取液

检测下限10ppb20ppb40ppb100ppb

样本提取液2ml4ml8ml20ml

然后加入8ml正己烷，振荡5分钟，室温4000转/分离心5分钟。

2）去除上层液体，取0.1ml下层液体加入0.4ml去离子水，混匀备用。