方法检测的中和抗体效价更接近。ELISA抗体检测方法的局限性主要有以下几个方面:(1)可能存在着与瘟病毒属其它病毒如牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、边界病病毒(BDV)的交叉反应;(2)无法识别弱毒疫苗或E2蛋白亚单位疫苗接种产生的抗体;(3)ELISA方法是针对特异性结合的抗原+抗体复合物进行检测而非中和抗体,结合抗体和中和抗体效价二者的相关性根据方法不同而有所差异。因此如果需要准确的抗体确认仍应采用VNT金标准方法检测,或根据建立的相应ELISA与VNT方法检测结果的相关性进行判断。
加样:调整移液器刻度,设定容量值。移液器移取液体试剂和样品血清。吸取液体时,移液器保持竖直状态,将吸头插入液面下2~3mm,用大拇指将移液器顶部按钮按至***停点,然后慢慢松开按钮回原点,接着将按钮按至***停点排出液体稍停片刻继续按按钮至第二停点吹出残余的液体后松开按钮。使用多道(如8道或12道)移液器,则可以将移液器的***道对准***个***头,然后倾斜插入,前后方向摇动即可卡紧,避免用重力撞击,吸头卡紧后可看到连接部分形成清晰的密封圈。处理大批量样本时,首孔与末孔加样时间间隔过长会导致各微孔间有不同的起始反应时间,从而影响到测量值的准确性和重复性。为保证不同样品的孵育时间一致,可先取待检样品、FDMVAC阴性血清、FDMVAC阳性血清不低于10μl分别加入96孔板中并做好记录,然后用多道移液器移至FDMVAC抗原包被板相应孔中。也可在抗原包被板直接加样。
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